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XL10-Gold Chemically Competent Cell

发布时间: :2020-08-24 20:51 浏览次数: :
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详细说明:

 XL10-Gold Chemically Competent Cell 使用说明书

产品说明:

XL10-Gold是目前转化效率最高的感受态细胞,由Stratagene开发的特异性用于大质粒或珍贵连接产物转化或构建文库的超级感受态细胞。XL10-Gold菌株为Hte(high transformation efficiency)基因型,HteStratagene开发的特异性提高感受态转化效率及大质粒转化能力的宿主菌基因型,已成功应用于40kd质粒的构建。[Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]赋予XL10-Gold缺失几乎所有已知的限制酶切系统;同时缺失核酸内切酶(endA),提高了质粒DNA的产量和质量;重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率,保证了插入DNA的稳定性;TetR CamR赋予菌株四环素和氯霉素抗性;lacIqZΔM15的存在使XL10-Gold可用于蓝、白斑筛选。XL10-Gold感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>2×109 cfu/μg

产品组成:

  

 

 

 XL10-Gold Chemically Competent Cell

10 × 100 µL

50× 100 µL

pUC19control vector10pg/μL

10μL

10μL

 

 

 

* 基因型:TetΔ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F proAB lacIqZΔM15 Tn10 (TetR) Amy CamR]

 

储存条件:

-80℃±10℃保存6个月。请勿将本品置于-20℃或液氮中保存。

 

使用方法:

1.       将感受态细胞从-80℃冰箱中取出,置于冰水浴中融化。

2.       将目的DNA(质粒或连接产物)加入到100μL感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育30分钟。

3.       42℃水浴热激35秒(非常重要——Efficiency decreases sharply when cells are heat-pulsed for <30 seconds or for >40 seconds.),立刻置于冰上,静置23分钟,晃动会降低转化效率。

4.       向离心管中加入200μL无抗LBTBSOC培养基,混匀后于220rpm37℃摇床振荡复苏60分钟,使转化物表达抗性基因。

 

5.       根据实验要求吸取适量菌液,涂布至相应抗生素的2YTLB培养基上,室温正置10分钟,待菌液被平板充分吸收后,37℃倒置过夜培养。

 

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