【产品概述】ALyS505N-0 无血清细胞培养基是专为细胞免疫治疗研究而开发，不含有任何动物蛋白质成分，含有重组或医疗级人类蛋白质的无血清细胞培养基。对人类外周血 T 淋巴细胞具有高增殖性，是细胞免疫治疗用首选培养基。

【产品用途】适用于人类外周血单核细胞诱导的 CIK、DC、LAK、CTL 等 T 细胞的扩增与活化，仅供科研使用。

【产品规格】1000ml/瓶

【标本处理】

1、血液分离

  1.1 将血液采集至含有肝素钠抗凝的采血管；

  1.2 在两支装有 15ml 淋巴细胞分离液的离心管上，分别小心地倒上 20～30ml 血液， 室温下，800xg 离心 20 分钟，缓升缓降; 

2、制备热灭活人类血浆

    2.1 用无菌吸管采集上层的血浆，收集至离心管中，56℃加热血浆 30 分钟，室温下， 1200xg 离心 10 分钟；

    2.2 用吸管将上清液采集至新的离心管，4℃保存，直至使用前取出; 3、制备 PBMC

  3.1 用吸管将第 2 层单个核细胞收集至新的离心管，加入 PBS 35ml 稀释细胞悬液， 500xg 离心 10 分钟；

3.2 移除上清液，加入 PBS 35ml 稀释细胞悬液，混匀，取 100μl 细胞悬液计数， 余下悬液 500xg 离心 10 分钟，弃上清。

【使用方法】

ALyS505N-0 无血清细胞培养基培养 CIK 细胞：

 1、在 T75cm2 的细胞培养瓶中加入 50 ml 含 10 灭活自体血浆细胞培养液，重悬细胞调整细胞密度大于 1.5x106 cells/ml，并添加 IFN-γ（1000IU/ml），置于 5  CO  、 37℃培养箱中培养；

  2、24h 后，培养瓶中加入 Lymactin-（T；50μg）、IL-2（1000IU/ml）、IL-1α（100IU/ml），继续培养

  3、第 3 天，将细胞转移到 T175cm2 培养瓶中，加入 50ml ALyS505N-0 培养基含 IL-2（1000IU/ml) ，置于 5 CO2、37℃培养箱中继续培养；

4、第 5 天，将细胞转移到 2 个 A-1000N 培养袋中扩大培养，每个 A-1000N 培养袋加入 100ml ALyS505N-0 培养基含 IL-2(1000IU/ml），置于 5  CO2、37℃培养箱中继续培养；

5、第 7～11 天根据细胞密度、细胞生长状态及培养基颜色变化补加 1000ml、1400ml ALyS505N-0 培养基含 IL-2(700IU/ml），置于 5  CO2、37℃培养箱中继续培养。

6、培养 14 天后回收细胞，取样品检测细胞活性、数量、表型、真菌、细菌、支原体、内毒素等指标。

【技术参数】