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Ideal for Recombinant Lentivirus Production

TransIT^®-Lenti 转染试剂 -

重组慢病毒颗粒概述及靶细胞感染。
(1) 用编码目的基因，水泡性口炎 G 蛋白 (VSV-G) 和必需病毒蛋白（例如 gag，pol 和 rev）的 3-4 种质粒转染生产细胞（例如 293T）。(2) 通过用生产细胞质膜出芽组装病毒并释放到上清液中，得到用 VSV-G 修饰的包膜。将含有病毒的培养基通过 0.45 μm 过滤器过滤以除去任何细胞。(3) 靶细胞经常在聚阳离子存在下用重组慢病毒颗粒转导，以增加聚集和摄取。病毒进入细胞，衣壳未被包裹，显示 RNA 基因组和病毒酶。病毒 RNA 被逆转录成 DNA，然后整合到宿主基因组中。(4) 转录和翻译导致由目的基因编码的蛋白质的产生。

具有 TransIT®-Lenti 转染试剂的高功能滴度。
将粘附的 293T/17 细胞用 pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP™ 转移载体转染到 6 孔板中，用 MISSION™ （1:1 比例，2μg/孔）驱动的慢病毒包装混合物用以下试剂转染：TransIT®-Lenti（3:1，体积重量比），Lipofectamine® 2000 (3:1)，Lipofectamine® 3000 (3:1:1)，25 kDa PEI (6:1) 或 CaPO4 沉淀（4 μg pDNA） /孔）。收获上清液，过滤 (0.45 µm)，并使用 293T/17 细胞滴定。在 8 μg/ml TransduceIT™ 存在下进行慢病毒转导，并使用 Guava easyCyte™ 5HT 流式细胞仪在转导后 72 小时测量 GFP 表达。误差条表示单独滴定的一式三份转染复合物。使用具有少于 20% GFP 阳性细胞的病毒稀释液计算功能滴度。

使用 TransIT^®-Lenti 转染试剂进行高效转染。
使用 TransIT^®-Lenti 转染试剂（3:1，体积重量比），使用 MISSION™ 载体（pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP™ 转移载体和慢病毒包装混合物）以 6 孔板形式转染粘附的 293T/17 细胞。转染 48 小时后，使用 Guava easyCyte™5HT 流式细胞仪检测 GFP 效率。误差条代表五个转染复合物。使用 Zeiss Axiovert S100 倒置荧光显微镜在转染后 48 小时（10 倍物镜）捕获图像。观察到的细胞变圆和细胞 - 细胞融合是由于水泡性口炎病毒 G 蛋白 (VSV-G) 的高表达，用于对重组慢病毒进行假型化。

慢病毒生产可放大。
使用 MISSION™ 载体（pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP™ 转移载体和慢病毒包装混合物（1:1 比例））以及 TransIT^®-Lenti 转染试剂（3:1，体积重量比），以 12 孔、6 孔板或100 mm 平板形式转染粘附的 293T/17 细胞。收获上清液，过滤 (0.45 µm)，并使用 293T/17 细胞滴定。在 8 μg/ml TransduceIT™ 存在下进行慢病毒转导，并使用 Guava easyCyte™ 5HT 流式细胞仪在转导后 72 小时测量 GFP 表达。误差条表示单独滴定的一式三份转染复合物。使用具有少于 20% GFP 阳性细胞的病毒稀释液计算功能滴度。

使用 TransIT^®-Lenti 进行无浓缩慢病毒的高转导效率。
使用 MISSION™ 载体（pLKO.1-puro-CMV-TurboGFP™ 转移载体和由 MISSION™ 提供支持的慢病毒包装混合物），利用 TransIT®-Lenti 转染试剂（3:1，体积重量比）或 Lipofectamine®2000 生产慢病毒。收获上清液，过滤 (0.45 µm)，并冷冻。利用 iCell®MotorNeurons (Cellular Dynamics International) 铺板后 5 天进行慢病毒转导。对于 TransIT^®-Lenti 和 Lipofectamine^® 2000，在 96 孔板的每个孔中加入 1 微升未浓缩的上清液。使用 guava easyCyte™ 5HT 流式细胞仪在转导后 72 小时测量 GFP 效率。误差条表示重复孔的 SEM。(B) 将 iCell® 运动神经元接种于 Ibidi 35 mm 培养皿中，并用使用 TransT®-Lenti 转染试剂和 MISSION™ 载体生产的慢病毒转导。使用 Zeiss Axiovert S100 倒置荧光显微镜，使用 63 倍浸油物镜，在转导后 72 小时捕获图像。

特性

·         高性能 – 提供高达八倍的功能滴度

·         简便的实验方案 – 无需更换介质，单一收获物

·         无动物源性成分 – 高性能可靠性

描述

·         TransIT®-Lenti 转染试剂旨在增强包装和转移载体向贴壁 HEK293T 细胞类型的传递，并增加重组慢病毒的产生。

·         包装质粒包括慢病毒基因组的结构 (gag)、酶 (pol)、包装 (rev) 和包膜 (VSV-G) 等基本病毒组分。该转移质粒编码目的基因，其两侧是长末端重复序列 (LTR)，以及 RNA 包装信号(Psi) 和 rev 响应元件 (RRE) 等其他必要成分。

重组慢病毒生产概述

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北京毕特博生物技术有限责任公司

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