鉴定：支原体是一类缺乏细胞壁的细胞，呈高度多形性，细胞培养中被支原体污染是比较常见的问题，因为污染来源太多，包括工作环境、操作者、血清、实验器材等，鉴定的方法如下。
1. 相差显微镜观察。其中可以采用直接观察或地衣红染色观察，直接观察时，位于细胞表面和细胞之间的暗色微小颗粒为支原体，但要与线粒体区分。
2. 荧光染色法。将细胞接种于盖玻片上，在细胞未长满前取出玻片，用不含酚红的Hank's液漂洗后，再用1:3醋酸甲醇固定10min，然后用生理盐水漂洗，置于用生理盐水配制的 Hoechst 33258(浓度为50ul/ml)中染色10min，荧光染料将支原体内的DNA着色，染色后用蒸馏水洗1~2min，滴加pH5.5磷酸缓冲液数滴，然后置荧光显微镜下观察。镜下散于细胞周围或附于细胞膜表面的亮绿色小点为支原体。
3. 电镜检查。制备电镜标本，用扫描电镜或透射电镜观察。
4. DNA分子杂交检查。按试剂盒说明进行，检出率高，但方法较复杂。
5. PCR。现有支原体PCR检测试剂盒销售，可按说明书检测支原体污染。
上：支原体污染细胞荧光图
下：无污染细胞荧光图
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预防：支原体污染属于微生物污染，预防手段与真菌污染相近，在此基础上，可用100微克每毫升的卡那霉素抑制支原体，但可能对细胞有所损伤，尽量不加抗生素。
污染去除：
1. 抗生素处理:。用100微克每毫升卡那霉素清除培养物中的支原体污染。亦有将细胞培养瓶直放,瓶内装人含600ug/ml 卡那霉素的生长液至瓶颈部,37C孵育 18h,然后移人含200ug/ml卡那霉素的生长液，可成功处理支原体。金霉素对细胞毒性较卡那霉素大，常用浓度为100~200ug/ml。对卡那霉素、四环素有抗药性的支原体可用泰乐菌素处理，对培养细胞无不良影响，污染细胞以50ug/ml泰乐菌素处理6天，或连续处理2代，可长期有效地清除支原体污染。
2. 高热处理。因支原体和细胞对热的耐受性不同，将受污染的细胞41℃作用5~10h，最长达18h，可以破坏支原体，而细胞仅少许损伤,即可恢复。对温度敏感的细胞株不能采用这种方法。
3. 巨噬细胞和抗生素联合处理。将同种动物腹腔巨噬细胞加入被支原体污染的细胞中(巨噬细胞与污染细胞比例为100:1)，再加入100ug/ml的抗生素，结合支持物方法培养逐日检查，直至支原体被巨噬细胞消除。
4. 鼠的传代培养。如果还是无法消除污染，该细胞为高价值的肿瘤细胞，则可以将肿瘤细胞接种与BALB/c裸鼠的颈背部（每只接种4×106细胞），接种3-5只，一个月后取瘤块进行原代培养。
5. 血清处理。将污染的细胞接种于含 10% 非灭活血清培养基中，孵育 6h后，去除了包括人-人杂交瘤在内的5种细胞系中污染的支原体，其中起作用的是补体成分。
6. 支原体去除试剂。用MRA处理细胞，每4天换一次液，连续处理15天。也有网友推荐MycoplasmaOUT™ Treatment试剂，用一天后，细胞恢复生长。
有关病毒污染的资料不多，但一般认为病毒污染不影响细胞培养，通过PCR技术可以检测。不过病毒污染对生产疫苗是不安全的。因此，至今，潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作的难题。有研究显示用伽马射线可清除牛血清的大部分病毒，现如今最值得期待的是下游工艺中除病毒过滤器的开发。
鉴定：
1. 形态学鉴定。形态观察是辨认细胞最简单和最直接的方法，但我们也应意识到它有
一定的不足，因为其中多数细胞形态与不同培养环境对细胞形态的可塑性有关。例如,在单层汇合状态心部位生长的上皮细胞，一般形态规则，呈多角形，而且边缘清晰明确，而生长在小片边缘同样的细胞，形态就不规则，呈伸开状；如果发生转化，就会从小片上脱离，变为成纤维细胞样的形态。
2. 种属鉴定。染色体分析是区分物种的最佳方法。 同工酶电泳也是一种较好的诊断
检测方法，而且比染色体分析快，但需要合适的仪器和试剂。
3. 谱系或组织标记。如细胞表面抗原、中间纤维蛋白、酶类、分化产物，根据以上物
质的差异，运用流式细胞术等技术，鉴定是否发生细胞交叉污染。
4. STR分型。
预防：1. 实验器材如吸管不能混用。几种细胞同时实验时,器材要做好专用标记。
2. 细胞培养液公用时，细胞吸管和细胞用液要分开，千万不能用细胞吸管直接吸取细胞培养液。吸取培养液的吸管尖端不要触及培养瓶瓶口，避免把细胞带到培养液瓶中，防止进行其他细胞培养操作时导致细胞污染。
3. 所有转来的细胞或自己所建的细胞系都要在早期留有充足的冻存样本备用，一旦发生细胞交叉污染，可以复苏早期冻存细胞来使用。
去除方法：解决细胞交叉污染的问题最好的方法就是进行单克隆化，前提是要保证原细胞株还存在。具体是通过有限稀释法实现单克隆化，然后运用鉴定手段确保不存在其他杂细胞，即可去除细胞交叉污染。
