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MP的FastDNA® SPIN Kit for Soil中文说明书

作者:admin 来源:本站 发布时间: 2015-05-29 19:08  浏览次数:
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FastDNA® SPIN Kit for Soil (土壤基因组DNA提取试剂盒)

 

FastDNA SPIN Kit for Soil中文说明书

 简介

       FastDNA® SPIN Kit for Soil的目的是从土壤样品中提取基因组DNA 供PCR使用在不到30分钟内。快速DNA提取方法排除使用有害的有机溶剂,如苯酚和氯仿。该工具包可在土壤社区从所有的细菌,真菌,植物和动物的基因组DNA提取。

       试剂盒包括三个部分:

 

1。裂解

 

Lysing Matrix E tubes中含有的陶瓷和硅粒子,旨在有效地溶解所有不同来源的微生物,包括真细菌孢子和芽孢,革兰氏阳性菌,酵母菌,藻类,线虫和真菌。

2。均质化试剂

 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer都经过精心挑选和准备,使完整的样本同质化和蛋白增溶。试剂能够以最小的RNA污染提取基因组DNA。

 

3。 DNA纯化和洗脱试剂

  

GENECLEAN ?过程是他们用来纯化基因组DNA。程序纯化DNA用专门的硅胶基质的同时消除污染物,抑制并发反应。

 

* Binding Matrix悬浮

 

      * SEWS-M(盐乙醇洗,用前加100ml乙醇)

 

* DES(DNA洗脱液超纯水)

 

 

试验方案

 

样品处理:

 

 

 

  

1。添加500毫克的土壤到Lysing Matrix E Tube。

 

由于FastPrep ?仪器的移动,在管内看到大量的聚集。相同Lysing Matrix不应超过管的体积的7 / 8。留在管的空间,也提高了更好的同质化的机会。 [见注1] 裂解:

 

加入978μl Sodium Phosphate Buffer 和122μl MT Buffer。 [见注1]

 

2。 在FastPrep ?仪器中混匀40秒的速度6.0。

 

3。14000 XG离心Lysing Matrix E Tubes 5-10分钟。[见注2]

4。上清转移到一个2ml干净的管。加入250μlPPS试剂和混合,用手摇动管的10次。

5。 14000 XG离心5分钟沉淀沉淀。上清转移到一个干净的15毫升管。 上清液加入1ml Binding Matrix Suspension。 (Binding Matrix在用前重悬均匀) 

 

 

6。放在一个旋转器或手工反转2分钟,让DNA结合基质。将管放架上静置3分钟,让硅胶基质沉淀。

 

7。小心去除500μL上清,避免碰到沉淀的Binding Matrix。弃上清。重悬Binding

 

TMMatrix在剩余的液体中。约600μl的混合物转移到SPIN Filter,14000 XG离

 

心1分钟。倒空Catch Tube,并把剩下的上清加到SPINTM Filter中离心过滤。

 

8。添加500μL SEWS-M 到SPINTM Filter,离心1分钟,在14000 XG。倒出流过液并把SPINTM Filter放回Catch Tube。14000 XG离心2分钟,在清干SPINTM Filter中的剩余SEWS-M

9。移动SPINTM Filter到新的Catch Tube,室温下风干5分钟。

10。加入50-100μL DES轻轻的重悬,轻轻搅动滤膜用枪头或涡流/手指轻弹,

 

 

  

重悬为高效的DNA洗脱二氧化硅矩阵。在14000 XG离心1分钟,转移洗脱的DNA到Catch Tube。 DNA是目前应用就绪。

  

 

注释

 

请阅读在进行任何FastPrep® DNA提取 之前 1。注1

 

重要:留下约0.25cc的空气空间。如果留下太少的空气空间,可能导致样品的损失,由于管故障或变形。样品的损失是由温升FastPrep ?运行期间使压力增加。在管内预留0.25cc空气空间,足够防止在例行FastPrep ?运行中样品损失。 2。注2

扩展到15分钟的旋转,可增强消除过多的碎片从大量的样品或从复杂的细胞壁的细胞。

注意:请确认管重量平衡和管的侧面和底部不会刮檫到你的离心壁,因为这将导致样品的快速流失的重量和平衡。

 

 

 

 

FastDNA® SPIN Kit for Soil (土壤基因组DNA提取试剂盒)

 

 

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