生物知识

细菌的培养

作者:admin 来源:网络 发布时间: 2013-07-20 13:41  浏览次数:
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一般的细菌都可以用人工的方法进行培养,以研究它们的各种生物学特征或制备菌苗。培养细菌时,除采用合适的培养基外,还要供给一些必要的培养条件,如温度、气体等。
1.  进行活化的话是用斜面好还是放液体培养基摇瓶好呢?保藏的话用多少浓度的甘油?
1.1  斜面和平板活化与液体活化都可以,斜面较好,但液体活化如果时间控制得好,不会造成传代多的现象。
1.2  基因工程酵母的保存方法:与野生菌一样,要用甘油保藏的话,最好是在对数期,一般摇床培养20小时左右,过夜培养后保藏就可以。可将酵母菌在液体培养基培养3~5天,然后与100%甘油1:1混合冻存即可.即甘油浓度50%。
2.  菌体不生长
2.1  先查培养条件。温度很关键, 校正一下温度计是否正常指示;还要其他条件(湿度,摇床转速等)。
2.2  查原材料。尤其是原材料的保存问题,最好在4度冷藏。
2.3  查菌种
2.4  如果长得慢,加大接种量看一下。
2.5  消毒有没有问题
3.为什么会发生菌体自溶?发生菌体自溶会让发酵参数发生什么变化
自溶和培养条件有关系,比如PH突然变化会引起菌体渗透压的变化导致自溶,还有温度的影响等;一般来说菌体也有自己的生存时限(依培养物变化而变化),也会产生自溶。
3.1  控制条件不好,PH和温度不适合溶氧太低使菌体生长异常,产生溶菌酶自溶;
3.2  营养条件不好,营养跟不上,碳源不足自溶;
3.3  菌体衰老自溶,菌种培养时间过长,造成老化。改换酵母粉,增加一些生物素及微量元素可以消除自溶的问题;
3.4  过早的表达产物往往会对细胞产生毒害作用,使宿主菌的比生长速率下降甚至使细胞死亡、自溶;
3.5  感染噬菌体   
发生菌体自溶现象:pH升高,溶氧升高,氨氮回升,镜检时菌体空、碎
4.  培养基组分对芽孢杆菌产生芽孢的影响
一般加入Mn离子有助芽孢形成,另外培养基中注意磷酸盐含量不要太高了,高了不利于形成芽孢的。Mn的浓度大概在5-50ppm之间。
5.  质粒小量提取之细菌的培养及收集
将含有质粒菌种接种在LB固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24h。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB液体培养基(含50μg/ml  Amp)中,37℃振荡培养约12小时至对数生长后期。

 

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