作者：刘建国 袁惠德 陈祥云 周海敏
【关键词】 注射用盐酸阿霉素
【摘要】 目的 考察了35批注射用盐酸阿霉素的细菌内毒素检查法可行性。 方法 《中国药典》2000年版细菌内毒素检查法。 结果 本品浓度大于2.5mg/ml有干扰作用。 结论 只要把检品稀释为2.5mg/ml选用灵敏度为0.5EU/ml的鲎试剂可用细菌内毒素检查。
【关键词】 注射用盐酸阿霉素;细菌内毒素;鲎试剂;热原;抑制/增加试验
Study on BET feasibility of doxorubicin hydrochloride with LAL
LIU Jian-guo，YUANHui-de，CHEN Xiang-yun，et al.
Zhejiang Taizhou Prefectural Institute for Drug Control，Zhejinag318000，China
【Abstract】 Objective To inspect on the feasibility of bacterial endotoxin test（BET）for thirty-five batches of doxorubicin hydorchloride for Inj.Methods BET of China pharmacopoeia.Results Interferential effect was shown on the density above2.5mg/ml.Conclusion The dilution of2.5mg/ml could be tested by limulus amebocyte lysate with the sensitivity of0.5EU/ml.
【Key words】 dexorubicin hydrochloride for inj;bacterial endotoxin;limulus amebocyte lysate（LAL）inhibition/strengthen test;pyrogen
注射用盐酸阿霉素，USP23版早已收载用细菌内毒素进行检测。我国除《浙江省药品标准》（1993年版）规定采用兔法进行热原检查外，尚末在国内文献和杂志上发现对此药的细菌毒素研究。为此，对注射用盐酸阿霉素的细菌内毒素检测方法进行了探讨，现报告如下。
1 实验材料
1.1 鲎试剂 批号200406041，灵敏度0.5EU/ml，0.1ml/支，10支/盒;湛江安度斯生物有限公司。
1.2 细菌内毒素工作标准品 批号0212250，10EU/支，10支/盒;湛江安度斯生物有限公司。
1.3 细菌内毒素检查用水 批号W2003-3，10×10ml/盒，中国药品生物制品检定所。
1.4 注射用盐酸阿霉素 批号20040416，20040823，20040909，20040103，20040223，20040617，规格10mg/瓶，浙江海正药业股份有限公司提供，热原检查按《浙江省药品标准》1993年版符合规定。
1.5 仪器与设备
1.5.1 微量移液器 50～250μl，200～1000μl上海求精生化试剂仪器有限公司（MC）。
1.5.2 ZH-2自动漩涡混合器 天津药典标准仪器厂。
1.5.3 电热恒温水温箱 上海浦东荣丰科学仪器有限公司。
1.5.4 S.C101型鼓风电热恒温干燥箱 浙江嘉兴市新塍电器厂。
2 方法与结果
2.1 鲎试剂灵敏度标定 按《中国药典》（2000年版）检查，用细菌内毒素检查用水将细菌内毒素工作标准品按1→2等比稀释成系列浓度的细菌内毒素浓度，然后与鲎试剂混合置37℃水浴60min，用反应终点浓度X计算本批鲎试剂灵敏度，即λ 0 =lg -1 ∑X/4=lg -1 （lg0.5+lg0.5+lg0.5+lg0.25）/4=0.35，因λ 0 在0.5λb～2.0λb之间，故以下实验λb=0.5EU/ml计。
2.2 细菌内毒素限值计算 参照美国药典（1995年版）规定细菌内毒素限值为2.2EU/mg将注射稀释浓度为1.1EU/mg和《浙江省药品标准》（1993年版），本品热原检查注射剂量为2.25mg/ml，1ml/kg注射。本品细菌内毒素理论限值为L（K/D=5EU/2.25mg/ml×1ml/kg×2.25mg/ml=5）。
2.3 本品最大有效稀释倍数MVD MVD=L/λb=5/0.5=10倍;λb为鲎试剂灵敏度0.5EU。
2.4 干扰试验 用无菌、无热0.9%氯化钠注射液将样品稀释成1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶20系列浓度。以各稀释浓度样品将细菌内毒素工作标准品按1→2等比稀释成系列浓度的内毒素浓度，以各稀释浓度的样品稀释的内毒素系列溶液与鲎试剂混和进行抑制增强试验。结果见表1。6份样品的反应结果均相同。
2.5 热原检查结果 将6批样品稀释10倍与0.5EU灵敏度的鲎试剂混合结果均为阴性，而将6批样品稀释10倍加入2λ细菌内毒素工作标准品结果均为阳性。6批样品热原检查结果均符合规定。
3 讨论
由表1可知，样品仅对1∶2稀释液有干扰作用，但在1∶4稀释时作用消失。与最大有效稀释倍数比较，说明干扰作用不强。
表1 抑制增强试验结果（略）
用1∶4稀释对该厂35批热原检查符合规定的样品进行鲎试剂检测，结果均符合规定。与美国药典（1995年版）规定的注射用盐酸阿霉素浓度稀释为1.1EU/mg比较，《浙江省药品标准》（1993年版）制订的热原检查稀释的2.25mg/ml，注射剂量为1ml/kg，比美国药典要宽了一倍。因此，在我国建立细菌内毒素方法学时，考虑该品种的质量情况，建议可按美国药典（1995年版）规定的注射用盐酸阿霉素细菌内毒素限值为1.1EU/mg为宜。
（编辑:李 弋）
作者单位:318000浙江省台州市药检所
318000浙江台州浙江海正药业股份有限公司 |
